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以下文章來(lái)源于技爾上海 ，作者技爾GL Sciences
您是否經(jīng)歷過(guò)分析寡核苷酸、蛋白等生物樣品時(shí)出現(xiàn)吸附拖尾嚴(yán)重，進(jìn)而導(dǎo)致檢測(cè)靈敏度低、重現(xiàn)性不好等問(wèn)題? ProteoSil生物用液相色譜柱[柱」您一臂之力!
隨著生物醫(yī)藥行業(yè)的高速發(fā)展，各個(gè)生物藥細(xì)分領(lǐng)域的質(zhì)量控制也日趨完善。GL Sciences緊跟行業(yè)發(fā)展腳步，研發(fā)了ProteoSil系列生物用液相色譜柱，可應(yīng)用于核酸、寡核苷酸、肽段、蛋白、單克隆抗體、疫苗等分析物。
下文將為您詳細(xì)介紹這款新品，同時(shí)也會(huì)為大家分享幾個(gè)應(yīng)用案例。
一、產(chǎn)品特點(diǎn)
通常含有磷酸基團(tuán)及金屬配位的化合物較易與不銹鋼表面的金屬離子產(chǎn)生吸附。金屬吸附會(huì)對(duì)峰形、檢測(cè)靈敏度和重現(xiàn)性產(chǎn)生負(fù)面影響，并降低定量分析的性能。
雖然可以通過(guò)重復(fù)注入高濃度樣品來(lái)抑制吸附，但這種方法既費(fèi)時(shí)又昂貴。另一種方式是使用含有螯合劑的溶液來(lái)抑制吸附，但是此方法不適用于LC-MS分析，因?yàn)樗赡軐?dǎo)致污染和靈敏度降低。所以在做生物分析時(shí)建議選擇PEEK材質(zhì)的色譜柱。
ProteoSil系列色譜柱除了有PEEK材質(zhì)外，其不銹鋼(SUS)材質(zhì)也進(jìn)行了InertMask惰性化處理技術(shù)。這是一種表面失活的功能薄膜處理技術(shù)。基于該涂覆技術(shù)，在不銹鋼管內(nèi)壁金屬部件上進(jìn)行均勻涂覆，使金屬表面覆蓋了一層高彈性的玻璃薄膜。因此不銹鋼(SUS)材質(zhì)的色譜柱一定程度上也可以穩(wěn)定地分析高金屬吸附性化合物(如胺類等)。
ProteoSil有常規(guī)100 Å，200 Å，300 Å的規(guī)格，對(duì)填料的硅膠孔徑大小進(jìn)行精確控制，使其滿足生物分析的多樣化選擇。具體而言，如200Å孔徑適合于分析分子量范圍從幾千Da到幾萬(wàn)Da的化合物，為多肽和寡核苷酸的分析提供較佳性能。
*填料孔徑和適合分析物分子量的范圍：
ProteoSil擁有多種固定相可選。常規(guī)反相模式有C18,C8,C4，HILIC模式有烷基酰胺基，體積尺寸排阻模式有DIOL固定相可供選擇。
ProteoSil擁有不銹鋼，PEEK，PEEK內(nèi)襯不銹鋼( 在使用UHPLC時(shí)能夠增強(qiáng)色譜柱的耐壓性)三種材質(zhì)。
除了官能團(tuán)化學(xué)修飾和封端處理，GL Sciences是自主獨(dú)立生產(chǎn)合成硅膠填料的廠商之一，生產(chǎn)的色譜柱具有良好的批次重現(xiàn)性。
二、應(yīng)用案例
案例一：寡核苷酸的分析
分析條件：
色譜柱: ProteoSil 200-C18(3μm, 100x3.0mm I.D.)
流動(dòng)相:
A) 5mM TEAA in H2O(pH6.5)/CH3CN=80/20,v/v
B) 5mM TEAA in H2O(pH6.5)
A/B=5/95-(60min)-50/50,v/v .
流速: 0.8mL/min
柱溫: 40°C
檢測(cè)器: UV 260nm
樣品:
1.CATGACGTTCCTGATGCT(18mer,M.W.5465.61)
2.CCATGACGTTCCTGATGCT(19mer,M.W.5754.79)
3.TCCATGACGTTCCTGATGCT(20mer, M.W.6058.99)
案例二：肽和蛋白質(zhì)的分析
分析條件：
色譜柱: ProteoSil 300-C18(5μm,150x4.6mm I.D.)
流動(dòng)相:
A) 0.05% TFA in (CH3CN/H2O=90/10,v/v)
B) 0.05% TFA in H20
A/B =20/80-40min-40/60,v/v
流速: 1.0mL/min
柱溫: 30°C
檢測(cè)器: UV 280nm
進(jìn)樣量: 20μL
樣品:
1.催產(chǎn)素0.05mg/mL
2.蛋氨酸腦啡肽0.11mg/mL
3.亮氨酸腦啡肽0.11mg/mL 4.血管緊張素Ⅱ 0.05mg/mL 5.血管緊張素Ⅰ 0.16 mg/mL
6.胰島素0.05mg/mL
7.胰島素B鏈0.10mg/mL
保護(hù)柱安裝在進(jìn)樣口和分析柱之間，主要用于保護(hù)分析柱。有3種不同類型可供選擇。
總結(jié)：針對(duì)生物制藥及其他易吸附的金屬配位物，建議選擇ProteoSil生物用液相色譜進(jìn)行分析。歡迎各位老師試用！
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