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chiral_agp 100.4操作說明

更新時(shí)間:2011-07-21瀏覽:4861次

 

CHIRAL-AGP 100.4操作說明
1、安裝
AGP100.4出貨溶劑為15%異丙醇蒸餾水溶液。先用蒸餾水沖洗,開始流速較低,然后慢慢增加到0.5ml/min,并維持2mins,隨后流速增加到0.8-0.9ml/min時(shí)保持10min,使用流動(dòng)相平衡色譜柱,推薦流速為0.8-0.9ml/min。
為了保護(hù)分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染,推薦使用保護(hù)柱,且必須定期更換保護(hù)柱,否則將影響分析柱的性能,用于生物分析時(shí)尤為重要。
2、保存
色譜柱室溫保存。使用時(shí),可以在色譜系統(tǒng)中過夜。但是當(dāng)緩沖鹽中沒有有機(jī)改性劑,或者有機(jī)溶液中含有低濃度乙腈時(shí),必須非常小心,因?yàn)樵谶@樣的流動(dòng)相中微生物生長(zhǎng)迅速。所以流動(dòng)相必須現(xiàn)場(chǎng)配制。周末或者短期保存,可將色譜柱置于10%異丙醇的蒸餾水中。長(zhǎng)時(shí)間的保存,請(qǐng)保存在15%的異丙醇蒸餾水中,使用前,請(qǐng)重復(fù)操作上面的安裝步驟。
3、流動(dòng)相組成
使用不同種類的緩沖液能得到的分離效果,比如:磷酸鈉或磷酸鉀緩沖液,乙酸銨或乙酸鈉緩沖液,甲酸甲酯或檸檬酸緩沖液。推薦濃度范圍0.01-0.1M,正常:10-20mM。
4、pH
色譜柱pH范圍:4-7,pH值長(zhǎng)時(shí)間的大于7或者小于4,都可能縮短色譜柱壽命,導(dǎo)致二氧化硅分解。
5、有機(jī)改性劑
推薦使用下列有機(jī)改性劑:1-丙醇,異丙醇,甲醇,乙醇和乙腈,丙醇和異丙醇及乙腈是使用頻繁的有機(jī)改性劑。無電荷改進(jìn)劑的類別和濃度對(duì)分離因子的影響很大。如:1-丙醇,異丙醇和乙腈在異構(gòu)體選擇性方面有很大的不同,見方法開發(fā)部分。使用陽(yáng)離子和陰離子改性劑也能調(diào)整保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性。但是,由于對(duì)基體的高親和力,有些改性劑很難全部洗脫,這樣,可能影響色譜柱的性能。我們推薦使用無電荷的、陰離子的、陽(yáng)離子的改性劑。
室溫范圍20-25℃,但是色譜柱也能在高于或低于該溫度下使用,然而當(dāng)色譜柱使用溫度過高時(shí),對(duì)所有硅膠基色譜柱,都將縮短色譜柱壽命。
6、樣品
當(dāng)進(jìn)樣針體積為10-20μL時(shí),推薦的樣品濃度低于0.10mg/ml,如果可能,將樣品溶解在流動(dòng)相中,如果樣品在流動(dòng)相溶解性不好,加一些高濃度的有機(jī)溶劑改性劑,但是有機(jī)改性劑的濃度太高,小心引起緩沖鹽析出沉淀。避免將樣品溶在有機(jī)溶劑中。不要注射不干凈的樣品或者樣品中包含有未溶解化合物。在生物分析過程中,使用分離技術(shù)過濾樣品溶液,定期更換保護(hù)柱。
7、清洗色譜柱
如果色譜柱被疏水性原料污染了,將色譜柱反過來(不接檢測(cè)器),用25%的異丙醇蒸餾水溶液沖洗一個(gè)晚上,流速0.2ml/min。
8、方法開發(fā)(UV檢測(cè)器)

樣品特征和初的流動(dòng)相
化合物類型
初流動(dòng)相
疏水性化合物
10mM醋酸銨或醋酸鈉緩沖液,pH4.5
親水胺,弱酸(苯酚等),非質(zhì)子類(胺,酯,醇等)
5%的異丙醇10mM磷酸鈉緩沖液,pH7.0
強(qiáng)酸(羧酸)
10mM磷酸鈉緩沖液,pH7.0
如果化合物包含一些官能團(tuán),按照質(zhì)子官能團(tuán)確定使用下列哪種方法

 
疏水性胺:根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果,請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間,無異構(gòu)體選擇性
pH值或無電荷改進(jìn)劑的優(yōu)化。
逐漸增加pH值,用異丙醇調(diào)整保留時(shí)間,
         
檢測(cè)另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
         
測(cè)試低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑:辛酸1-20mM;己酸或庚酸1-20mM;四乙基胺或四丙基胺1-5mM。
pH降低4,或增加異丙醇。
      
測(cè)試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
 
 
測(cè)試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑:異丙醇,乙腈,甲醇,丙醇,乙醇。
        
測(cè)試低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑:辛酸1-20mM;
己酸或庚酸1-20mM;四乙基胺或四丙基胺1-5mM。

 
親水性胺,弱酸,非質(zhì)子化合物:根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果,請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間,無異構(gòu)體選擇性
pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低異丙醇的濃度。
        
測(cè)試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
        
胺:檢測(cè)低濃度質(zhì)子改進(jìn)劑:辛酸1-20mM;己酸或庚酸1-20mM;四乙基胺或四丙基胺1-5mM。
pH值逐漸減低,增加異丙醇的濃度。
       
測(cè)試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
 
見疏水性胺的操作流程

 
強(qiáng)酸(如羧酸):根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果,請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間,無異構(gòu)體選擇性
pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低pH值,增加緩沖鹽濃度到50-75mM(高濃度100mM)
       
試試低濃度(1-5mM)質(zhì)子改進(jìn)劑DMOA(N,N-二甲基辛胺)
添加異丙醇
 
 
         
檢測(cè)不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
檢測(cè)不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
         ↓
試試低濃度(1-5mM)質(zhì)子改進(jìn)劑DMOA(N,N-二甲基辛胺)

 
 
AGP方法開發(fā)(MS檢測(cè)器)

樣品特征和初的流動(dòng)相
化合物類型
初流動(dòng)相
疏水性化合物
10mM醋酸銨緩沖液,pH4.5
親水胺,弱酸(苯酚等),非質(zhì)子類(胺,酯,醇等)
5%異丙醇的10mM醋酸銨緩沖液,pH7.0
強(qiáng)酸(羧酸)
10mM醋酸銨緩沖液,pH7.0
如果化合物包含一些官能團(tuán),按照質(zhì)子官能團(tuán)確定使用下列哪種方法

疏水性胺:根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果,請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
異構(gòu)體選擇性低或沒有,保留時(shí)間低
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
保留時(shí)間高,無異構(gòu)體選擇性
pH值或無電荷改進(jìn)劑的優(yōu)化。
逐漸增加pH值,用異丙醇調(diào)整保留時(shí)間,(濃度越低,選擇性越高)
         
測(cè)試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
         
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑:TEA(三乙基胺)1-20mM
pH降低4,或增加異丙醇。
      
測(cè)試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
 
 
測(cè)試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑:異丙醇,乙腈,甲醇,丙醇,乙醇。
      
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑:TEA(三乙基胺)1-20mM

 
親水性胺,弱酸,非質(zhì)子化合物:根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果,請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間,無異構(gòu)體選擇性
pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低異丙醇的濃度。
       
測(cè)試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
        
胺:檢測(cè)低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑:TEA(三乙基胺)1-20mM
pH值逐漸減低,增加異丙醇的濃度。
      
測(cè)試另一中無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
 
見疏水性胺的操作流程

 
強(qiáng)酸(如羧酸):根據(jù)初流動(dòng)相得到的結(jié)果,請(qǐng)按下列流程

保留時(shí)間和異構(gòu)體選擇性
沒有或低異構(gòu)體選擇性,低保留時(shí)間
異構(gòu)體選擇性和保留時(shí)間都高
高保留時(shí)間,無異構(gòu)體選擇性
pH值或無電荷改進(jìn)劑或緩沖鹽的優(yōu)化。
降低pH值,增加緩沖鹽濃度到50-75mM(高濃度100mM)
        
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑
添加異丙醇
 
 
      
測(cè)試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
測(cè)試不同的無質(zhì)子改進(jìn)劑:乙腈,甲醇,丙醇,乙醇
 
       
測(cè)試低濃度揮發(fā)性質(zhì)子改進(jìn)劑

9、保護(hù)柱的使用
為了保護(hù)分析柱不被高親和力和顆粒雜質(zhì)污染,推薦使用保護(hù)柱,且必須定期更換保護(hù)柱,否則將影響分析柱的性能,用于生物分析時(shí)尤為重要。
CHIRAL-AGP,CHIRAL-CBH,CHIRAL-HSA,均能提供保護(hù)柱
10、選擇適當(dāng)?shù)谋Wo(hù)柱
為了優(yōu)化色譜系統(tǒng)性能,保護(hù)柱的內(nèi)徑必須和分析柱的內(nèi)徑相匹配,每種色譜柱的保護(hù)柱內(nèi)徑必須和分析柱相匹配,標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)柱套CH10.3,適合所有內(nèi)徑的保護(hù)柱芯(2,3和4mm)
 
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